Posted by: nandito106 | October 20, 2009

Metode isolasi Mitokondria Tumbuhan

mitochondria

Dari praktikum yang pernah saya dapatkan ketika belajar biologi sel, ternyata mengektraksi mitokondria tidak sesulit yang saya bayangkan. Misalnya tanaman yang akan di isolasi mitokondrianya adalah kol, terutama pada bunga kol, karena bagian ini merupakan bagian yang paling banyak aktivitas metabolismenya. Bunga kol dipotong dengan ukuran 3-5 mm sampai tercapai berat 25 g, kemudian dimasukkan ke dalam mortar dan pestle yang sudah didinginkan kemudian ditambahkan 6 gr pasir laut dingin dan 20 ml buffer isolasi dingin lalu campuran tersebut digerus selama 2 menit sampai halus. Setelah 2 menit campuran ditambah dengan 20 ml bufer isolasi dingin kemudian digerus untuk 2 menit berikutnya. Hasil gerusan disaring melalui “cheesecloth” kemudian dikumpulkan di dalam tabung sentrifugasi 50 ml, kemudian mortar dibersihkan dengan bufer isolasi 5 ml kemudian dituang ke saringan. Filtrat hasil saringan kemudian disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 600xg pada suhu 40C. Hasil sentrifugasi yang berupa supernatant postnuklear diambil dengan menggunakan pipet ukur sebanyak 10ml kemudian dimasukkan ke dalam tabung sentrifuga bersih. Kemudian supernatant disentrigugasi kembali dengan kecepatan 12000xg selama 30 menit, hasil sentifugasi yang berupa supernatan postmitokondria diambil kemudian disimpan pada suhu  -200C. Pada pellet mitokondria ditambahkan 5 ml bufer uji kemudian disuspensikan dalam larutan bufer. Suspensi mitokondria diambil sebanyak 100mL kemdian dimasukkan ke dalam 8 ml bufer isolasi lalu diukur absorbansi suspensi mitokondria pada panjang gelombang 660nm, kemudian dihitung konsentrasi mitokondria, mitokondria disimpan pada suhu -200C untuk pengamatan enzim lanjut.


Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s

Categories

%d bloggers like this: